一、多酚氧化酶的提取时缓冲液中,加入抗坏血酸的目的是什么
在酶提取液中加入抗坏血酸,可测定抗坏血酸氧化酶的活性,加入抗坏血酸及焦儿茶酚,可测定抗坏血酸及多酚氧化酶两者的活性,相减即可求出多酚氧化酶的活性。抗坏血酸的消耗量,可用碘液滴定剩余的抗坏血酸。
二、抗坏血酸氧化酶的介绍
抗坏血酸氧化酶是一种含铜的酶，位于细胞质中或与细胞壁结合，与其它氧化还原反应相偶联起到末端氧化酶的作用，能催化抗坏血酸的氧化，具有抗衰老等作用，在植物体内的物质代谢中具有重要的作用。
三、抗坏血酸氧化酶 它出现在什么环节里的有什么作用
呼吸链的组分,植物体内的末端氧化酶的一种!
植物体内的末端氧化酶是将从基质传递来的电子,直接交给氧并产生 H 2 O或过氧化氢.植物体内的末端氧化酶有抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶等.这个复杂的氧化酶系统,有助于植物对不良外界环境条件的适应.
四、抗坏血酸相关酶活性的测定
实验四抗坏血酸含量及抗坏血酸过氧化物酶活性的测定
一、抗坏血酸含量测定
【原理】
还原型抗坏血酸(AsA)可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉(4，7－二苯基－1，10－菲咯啉，BP)反应形成红色螯合物。在534nM波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。脱氧抗坏血酸(DAsA)可由二硫苏糖醇(DTT)还原成AsA。测定AsA总量，从中减去还原型AsA，即为DAsA含量。
【仪器与用具】
离心机；分光光度计；研钵；试管。
【试剂】
5％三氯乙酸(TCA)；
20％TCA；
无水乙醇溶液；
0�4％磷酸—乙醇溶液；
0�5％BP—乙醇溶液；
0�03％FeCl3—乙醇溶液；
0�6g／L DTT；
NA2HPO4—NAOH溶液：以0�2Mol／L NA2HPO4和1�2Mol／L NAOH等量混合；
60MMol／L DTT—乙醇。
【方法】
1.制作标准曲线配制浓度为2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14Mg／L的AsA系列标准液。取各浓度标准液1�0Ml于试管中，加入1�0Ml 5％TCA、1.0ml乙醇摇匀,再依次加入0�5Ml 0�4%H3PO4—乙醇、1�0Ml 0�5％BP—乙醇、0�5Ml 0�03%FeCl3—乙醇，总体积5�0Ml。将溶液置于30℃下反应90Min，然后测定A534。以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
2.提取取植物叶片1�0g，按1∶5(W／V)加入5%TCA研磨，4000r／Min离心10Min，上清液供测定。
3.测定
(1)AsA测定取1.0Ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
(2)DAsA测定向1.0Ml样品液中加入0�5Ml 60MMol／L DTT—乙醇溶液，用NA2HPO4—NAOH混合液，将溶液PH调至7～8,置于室温下10Min，使DAsA还原。然后加入0�5Ml 20％TCA，把PH调至1～2。按AsA相同方法进行测定，计算出总AsA含量，从中减去AsA,即得DAsA含量。
二、抗坏血酸过氧化物酶(AsA－POD)活性
【原理】
AsA－POD催化AsA与H2O2反应，使AsA氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)。随着AsA被氧化，溶液中290nM波长下的消光值(A290)下降，根据单位时间内A290减少值，计算AsA－POD活性。AsA氧化量按消光系数2�8(MMol／L)／CM计算，酶活性可用每克鲜重每小时氧化AsA的微摩尔数μMol／g·H表示。
【仪器】
离心机；紫外分光光度计；研钵；试管。
【试剂】
50MMol／L K2PO4—KH2PO4缓冲液(PH7�0，内含0�1MMol／L EDTA－NA2)�
0�3MMol／L AsA；
20μMol／L AsA；
0�06MMol／L H2O2。
【方法】
1�酶液制备取1�0g植物叶片剪碎，按1∶3(W／V)加入预冷的50MMol／L K2HPO4—KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用两层纱布过滤，滤液在4000r／Min下离心10Min，上清液作酶粗提液供测定。
2.酶活性测定3Ml反应混合液中含50MMol／L K2HPO4—KH2PO4缓冲液(PH7�0)，0.1MMol／L EDTA－NA2，0.3MMol／L AsA，0�06MMol／L H2O2和0.1Ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30s内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。
【思考题】
1.抗坏血酸在植物体内有何生理意义�
2.简述抗坏血酸过氧化物酶活性的测定原理。
